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矮牵牛的接种技术
来源:矮牵牛的接种技术发表日期:2014-10-29
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台外准备工作

1.外殖体的选取、灭菌:矮牵牛的组织培养以嫩叶作为外殖体效果较好。可从播种繁殖的植株上取材。在此之前2--3周,最好把母株置于温室内培养,不要喷水。在接种前选择健壮无菌的嫩叶剪下,放于自来水下冲洗1小时,水流不宜过大,必要时可在盛放外殖体的玻璃器皿口上覆盖一层纱布,以缓冲水流压力。清洗完毕之后将其放人2%次氯酸钠溶液中消毒10分钟,消毒过程中不断搅拌,以便消毒充分。台外消毒完毕后用消毒过的镊子夹取叶片放人灭菌后的三角瓶中,注人蒸馏水,放人超净工作台内,以备接种使用。

2.接种用具、药剂及培养基的准备:接种的用具有镊子、剪刀、培养皿、吸水纸、酒精灯、打火机、干净抹布,其中镊子、剪刀、培养皿在放入超净工作台之前必须经过干热灭菌。所用的药剂有戊二醛(1:200)、酒精(75% ) ,蒸馏水,分别放人试剂瓶中,另外准备一个废水瓶。

在接种前要制作好接种培养基,经过高压灭菌冷却后放人超净工作台内,放不下的放在接种室的小搁架上以备用。

3.接种室、超净工作台的消毒准备:在接种之前打开接种室上方及超净工作台内的紫外灯,照射30分钟,另外打开超净工作台开关,让其通风巧分钟后可人台操作。

4.接种人员的准备:接种人员进人接种室之前应带上口罩,双手清洗干净,一旦进入室内,尽量不要说话,以防细菌夹带在气流中进人培养容器内,造成培养基的污染,另外动作要轻巧。

台内接种工作

1.台内灭菌:打开超净工作台的人口处,双手进人,首先将浸泡外殖体的蒸馏水倒人废水瓶中,然后将戊二醛注入三角瓶中进行消毒10分钟。在外殖体消毒过程中双手用酒精进行手面灭菌,另外用抹布将双手所能触及到的地方进行擦拭。

2.接种:外殖体台内消毒时间到时,将戊二醛倒入废水瓶中,用蒸馏水冲洗外殖体5-8次,清洗过程中要不断摇晃,冲洗后的水全部倒入废水瓶。清洗完毕用无菌吸水纸吸干水分,放人已经灭菌的培养皿中。然后点燃酒精灯,左手拿起镊子,右手拿起剪刀,在酒精试剂瓶中浸泡后靠近外火焰灼烧,冷却后切割外殖体,一般切成5毫米见方的小块若干。

切割完备,打开培养基瓶,左手拿三角瓶,右手拿起镊子,三角瓶瓶口不能直立,将瓶口在火焰上灼烧数秒钟,要不断转动。镊子灼烧冷却后夹取一块外殖体送人三角瓶中,轻轻插人培养基的中间位置,插入过程中尽量不要接触瓶壁,插人后,镊子放回原处,轻轻系上封口纸,便完成了第一瓶的操作。依次再接第二瓶、第三瓶,接完为至。

3.接种后的清理:接种完备后要首先熄灭酒精灯,然后取出培养基瓶送往培养室,返回时将台面清理干净,废水、外殖体残渣等要取出,清理干净后关闭超净工作台。